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发布时间:2016-01-28
抗原或抗体包被完成后,固相载体表面依然存在未被占用的位点,这些位点还可以继续结合抗原或抗体,为了排除这些位点对ELISA后继步骤的干扰,就需要引入一些无关的物质将这些位点占用,这个过程就是封闭。最常用的办法就是使用惰性蛋白封闭,常见的惰性蛋白可以是0.05-0.5% BSA、1%明胶、5%脱脂奶粉、10%小牛血清,1-3% Casein,也可以采用去垢剂进行封闭,如Triton X-100, Tween-20等。其中5%脱脂奶粉价格最便宜,在一般实验室常规实验中应用较多,但是由于奶粉的成份复杂,批次间差异非常 大,所以一般很少应用于试剂盒中。试剂盒中应用较多的是成份相对简单的BSA和明胶,需要注意的是有些厂商生产的BSA里含有较高浓度的牛抗体,在实验中有可能与二抗进行结合从而造成假阳性的情况。
结果的判读 ELISA的结果可以根据需要采用肉眼判读或用酶标仪判读。肉眼判读只适用于定性ELISA,如果需要定量则必须使用酶标仪,并且一般都需要用终止液终止反应才能判读。使用酶标仪时也应该注意结合肉眼观察的结果大致判断仪器读出的结果是否异常。读完结果后,需要定性的根据判定依据给出“阳性”或“阴性”结论,需要定量的,先作出标准曲线,再通过标准曲线确定检测的样品中抗原或抗体浓度。
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