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ELISA实验样本的处理方法总结

发布时间:2016-03-15   

在ELISA实验中,样本的处理是一个关键步骤。在收集样本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。针对ELISA实验样本的处理方法,我公司技术做出了总结。那么液体样本及常见样本应当怎样处理呢?且听上海恒远生物为您细细道来……


一、血清
       室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
二、血浆
       应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
三、尿液
       用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
四、细胞培养上清
       检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
五、培养细胞
       检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
六、组织标本
       切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
七、牛奶样本的处理方法
       方法一:取10ml牛奶放入离心管,加入10ml乙酸乙酯,超声震荡30min,然后4000g离心10min(如两相之间出现乳化层,则将样品瓶放在80℃的水浴中约5min,再离心)移取1ml乙酸乙酯层至另外试管中,60℃氮气流下蒸干,残留物用缓冲液2ml缓冲后备用,前处理过程约需2小时。
       方法二:取10ml牛奶10℃3500G离心10MIN,祛除上层脂肪,取5ml脱脂奶粉加入150微升17.2%亚铁氰化钾,出现沉淀,漩涡混合,然后加入150微升53.5%硫酸锌。再次漩涡混合。15摄氏度3500g离心10分钟,取上层清液用缓冲液1:2稀释待用,前处理过程所需1小时。
八、粪便样本的处理方法
       对于粪便样本的处理,一般要求采集干的粪便,稀的粪便不利于检测(对样本处理带来难度,也会使准确性降低)。
       粪便样本处理如下:
       ① 收集:直接用医院临床收集粪便的耗材进行收集;
       ② 采样:一般选取的重量不能低于50mg,以1g为基准。称取1g加9ml的PBS(磷酸盐缓冲液,PH控制在7.2-7.4,浓度为0.01mol/L)换算成匀浆的比例就是10%;
       ③ 保存:匀浆后的样本如果采样周期在1周之内,可以保存在2-8℃,如果取样周期在一个礼拜以上一个月以内,-20℃保存。如果取样周期超过1个月,保存在-80冰箱!低温保存的话,尽量避免反复冻融。
九、植物组织样本的处理方法
       植物组织的提取,不管是根茎组织还是叶片组织还是果实组织,都应该采用鲜重的计重方式,一般要遵循以下原则:
       ① 称取的组织重量不能低于50mg。
       ② 匀浆的比例按照10%,即1g组织加9ml的匀浆液,匀浆液一般选取PBS(PH=7.2-7.4)
       ③ 组织在匀浆器匀浆过程中,匀浆液应该分2次加进去,这样匀浆更充分。
       ④ 充分匀浆完成后离心取上清,离心机的转数选取2000-3000转每分,转数不宜超过5000.离心时间为15-30分钟。