上海恒远生物科技有限公司
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【基本信息】
【产品名称】：大鼠抗内皮细胞抗体(AECA)ELISA试剂盒
【检测方法】：酶联免疫法/酶免法(ELISA)
【产品性状】：96T/48T，盒装液体
【贮 藏】：2-8°C
【有 效 期】：Elisa试剂盒二年，我公司Elisa试剂盒均为X新批次，可放心购买。
【主要成分】：酶标板,试剂,标准品等。
【标 本】：血清/血浆/细胞培养上清液/组织匀浆/组织液/尿液/分泌物
【质量承诺】：我们坚持对产品质量作不断的评估、创新和改善以确保您对我们产品的高度信任。
【待检样本】：体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆、心房水标本等
【样品采集】：Elisa试剂盒收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时，-20℃可保存1个月。-70℃可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。
【保 质 期】：半年(六个月)
一、ELISA试剂盒检测概述
ELISA（酶联接免疫吸附反应分析）是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。 由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。
实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即：用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务。
二、“大鼠抗内皮细胞抗体(AECA)ELISA试剂盒”特点概述
1.专一性强。抗原与抗体的免疫反应是专一反应，而免疫酶技术以免疫反应为基础，所检测的对象是抗原(或抗体)，使用的抗体除标记了酶以外，与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。
2.灵敏度高。由于抗体联结上了酶，因此，借助于酶与底物的显色反应，显示抗原与抗体的结合，大大提高了检测的灵敏性，使检测水平接近放射免疫测定法。
3.样品易保存。经过酶反应显示的有色产物大多比较稳定，因此有利于样品的保存。
4.结果易观察。对检测结果即可用肉眼观察，又可用显微镜观察，也可以用分光光度计进行比色测定，还可用显微镜观察。这是因为某些酶反应产物能使电子密度发生改变，从而引起被检测物的显示。
5.可以定量测定。溶液中的抗原物质，应用酶免吸附技术进行比色测定，依据光密度值的变化，可以定量。预计用细胞分光光度计可对组织内的抗原进行免疫酶技术的定量测定。
6.可以大规模测定样品。如有成千上万份样品需要进行检测，免疫酶技术都能在较短时间内完成。
7.仪器和试剂简单。对免疫没技术来说，不需要荧光显微镜，也不需要测定放射性的特殊仪器，所用仪器及试剂均属一般性仪器与试剂，普通实验室及生产应用单位均易购置
6、价格X惠，质量保证，X大限度的节省实验经费。
三、实验过程：
1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2. 加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，X一个孔与X后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)X好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3. 孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响X后的酶标仪读数。
四、“大鼠抗内皮细胞抗体(AECA)ELISA试剂盒”技术流程
双抗体夹心法(检测未知抗原)
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。
2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做X孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以X对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法(检测未知抗体)
1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。
2、加样：加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做X、阴性及阳性孔对照)
3、加酶标抗体：于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标X二抗体(抗抗体)0.05ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,X后一遍用DDW洗涤。
4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以X对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
五、ELISA注意事项
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间X好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，X好做复孔。
5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请X后乘以稀释倍数。
6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7. 底物请避光保存。
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
六、大鼠抗内皮细胞抗体(AECA)ELISA试剂盒问题解答
Elisa试剂盒阴性对照及阳性对照解析
Elisa试剂盒阴性对照及阳性对照：阴、阳性对照若有正确的结果，对试剂盒操作的结果可以有粗略的判断。
X对照：对ELISA试剂来说，X对照实际上是不加标本不加酶做对照。X对照主要测系统的吸光率。X对照在单波长测量时显得尤其重要
我司代理几千种ELISA试剂盒，数万种抗体，并代理世界X产品近万种，涉及分子生物学、分子免疫学、细胞生物学等生命科学研究的各个X域。为了节省您的时间，我们还可以提供代检测服务。
